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Fijación

Podemos definir “Fijación” como un proceso que consiste en alcanzar condiciones estables de los constituyentes tisulares, proteínas principalmente, debido a la interrupción de las reacciones enzimáticas. Es líneas generales la fijación busca interrumpir el desarrollo de los procesos orgánicos fijando y conservando de la manera más fidedigna posible el estado en que se encontraban los tejidos en vida, evitando los procesos de post – mortem, como por ejemplo, “la autólisis”, que consiste en la destrucción de los tejidos por sus propias enzimas locales producidas por los lisosomas.

Se llaman fijadores a las sustancias químicas o a los agentes físicos que se utilizan para tal fin.

Cualidades que debe tener un fijador:
1. Actuar con rapidez fijando a las células antes de que aparezcan los fenómenos agónicos o post-mortem (autólisis, desintegración, etc.).
2. Poseer alto poder de penetración para asegurar la fijación correcta hasta en las capas profundas de la pieza a fijar.
3. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban in vivo.
4. Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios para su observación ulterior (ejecución de cortes, coloración, etc.).
5. Impedir la desaparición de los elementos solubles durante la fijación o después de ella.
6. No provocar o impedir la producción de estructuras artificiales.
7. No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables o quebradizos.

Manera de actuar de los fijadores
Varía con la composición o naturaleza de los mismos: coagulando las proteínas sin combinarse con ellas (alcohol, ácido pícrico, yodo, calor), formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas (ácido crómico y sus sales), o reduciéndose en contacto con las mismas y originando en su seno un precipitado sumamente fino (ácido ósmico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).

La mayor parte de los fijadores actúan como oxidantes, favoreciendo así la coloración ulterior de los tejidos (recuérdese que éstos, en su mayoría, son reductores que muchos colorantes se transforman en leucobases incoloras al combinar una molécula de hidrógeno con su cromóforo).

Fijadores químicos
Son los más utilizados; pueden ser fijadores simples, constituidos por una sola sustancia química, y fijadores compuestos o mezclas fijadoras cuando varias sustancias intervienen en su constitución.

FIJADORES SIMPLES:
a) Formol al 10%, es el más usado. Su empleo es aconsejable en todos los casos en que no se disponga de un fijador especial, principalmente cuando se trata de fijar órganos o tejidos para estudios histológicos topográficos.
b) Alcohol etílico absoluto o de 96%, se usa generalmente en microquímica.
c) Alcohol metílico, se lo emplea con frecuencia para fijar frotis desecados (sangre, médula ósea, ganglio, bazo, líquidos de punción, etc.).
d) Ácido ósmico al 1 ó 2%, es poco penetrante pero enérgico, conserva muy bien estructuras celulares.
e) Bicromato de potasio al 3-5%.

En su composición intervienen un número variable de fijadores simples racionalmente elegidos con el fin de completar la acción de cada uno de ellos o atenuar sus defectos.

a) Líquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-acética.
b) Líquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-acética.
c) Líquido de Helly, mezcla Zenker-formol.
d) Líquido de Bouin, mezcla picro-formos-acética.
e) Liquido de Duboscq-Brasil, o Bouin alcohólico.

FIJADORES FÍSICOS:
1. Desecación.
2. Calor seco.
3. Calor húmedo.
4. Frío.
5. Congelación y desecación.

Poder de penetración

A fin de conocer el poder de penetración de éstos reactivos se ha establecido un valor K de difusión para cada sustancia fijadora y se debe aplicar según el tamaño de la muestra.

Si “d ”es la distancia infiltrada, “t ”el tiempo de fijación y “ K ”

la constante de difusión, de valores conocidos, resulta que :

Esta ecuación nos permite determinar el tiempo de fijación si consideramos que “d” se mide en mm y “K” representa la distancia infiltrada en 1 hora. Cómo lo que varía es el tamaño de la muestra, se puede determinar el tiempo de ex-posición en horas para que la muestra se fije correctamente.